1. 将装有冻存细胞的冻存管从液氮罐中取出,立即放入 37℃水浴中;
2. 在 37℃水浴中轻轻转动冻存管,直到冻存管内仅剩余一小块冰芯,使细胞迅速解冻(1 分钟内);
3. 将冻存管转移到超净工作台内;打开盖子前,用 75%酒精擦拭冻存管外部;
4. 将解冻的细胞逐滴转移到装有适量经过预热、适合该细胞系的完全生长培养基的离心管内;
5. 以大约 200×g 的离心力将细胞悬液离心 3-5 分钟;实际离心速度和时间取决于细胞种类;
6. 离心后,检查上清液是否清澈,有无完整的细胞沉淀;在无菌条件下,小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀;
7. 轻轻将细胞重新悬浮在完全生长培养基中,然后转移到合适的培养容器和推荐的培养环境中(注:培养瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数量,培养环境取决于细胞和培养基类型)。
四:细胞培养常见问题及解决方法